Микрореакция преципитации (МР) на сифилис
Rapid Plasma Reagin (RPR)

Что такое микрореакция преципитации

Микрореакция преципитации является нетрепонемным тестом,основанным на иммунологической реакции антиген-антитело.Реакция определяет в крови так называемые реагиновые антитела,которые организм вырабатывает против липидов поврежденных бледной трепонемой клеток организма и ,возможно, липопротеинов мембраны спирохет.Антилипидные антитела могут вырабатываться при многих заболеваниях и состояниях организма,сопровождающихся разрушением тканей,поэтому микрореакция преципитации является не подтверждающим сифилис тестом,а отборочным.
Микрореакцией тест назван в связи с тем,что для исследования необходимо незначительное количество исследуемого материала и реагентов,а преципитацией (от лат. Precepitacio - падение) в связи с тем,что обрузующийся в результате реакции антиген-антител комплекс выпадает в осадок (преципитация) с образованием хлопьев (флоккуляция).

Разновидности микрореакций

1. Микроскопический тест - оценка результатов реакции с использованием световой микроскопии для подсчета преципитантов - VDRL ( (по названию лаборатории-разработчика – Venereal Diseases Research Laboratory) - реакция с инактивированной сывороткой крови. При подозрении на нейросифилис при помощи VDRL исследуют спинномозговую жидкость.

2. Макроскопический тест - оценка результатов реакции невооруженным глазом -тест быстрых плазменных реагинов (Rapid Plasma Reagins, RPR),применяется в России под названиями реакция преципитации (РПР) с кардиолипиновым антигеном,отборочная реакция на сифилис (ОРС),микрореакция преципитации (МР),экспресс-диагностика сифилиса (ЭДС). Для подсчета применяют так называемые визуализирующие агенты,вовлекающиеся в комплекс антиген-антитело (чаще частицы угля и частицы толуидинового красного).

Количественная микрореакция преципитации
Проводится методом серийного разведения исследуемой сыворотки крови.Титром преципитинов считают последнее разведение плазмы или сыворотки крови,где обнаружен преципитат.

Когда применяется микрореакция преципитации

Скрининг на сифилис
Массовое обследование определенных групп населения.Для скрининга применяются дешевые,простые и быстрые по исполнению тест системы,основанные на микрореакции преципитации.Скринингу на сифилис подвергаются:

• Беременные женщины
• Доноры крови и органов для трансплантации
• Некоторые профессиональные контингенты (работники питания,образования,здравоохранения)
• Военнослужащие
• Лица,отбывающие наказание в местах лишения свободы
• Больные,готовящиеся к оперативному хирургическому вмешательству
• Лица,поступившие на стационарное лечение (обязательная вассерманизация - в России,странах СНГ и некоторых других странах)

Диагностика сифилиса
Для диагностики сифилиса применяются  комбинация количественной модификации микрореакции преципитации и трепонемных тестов на сифилис.Серологическое обследование на сифилис назначается в следущих случаях:

• Лицам,имеющих клинические признаки сифилиса
• Лицам с любыми генитальными язвами
• Лицам - половым партнерам больных сифилисом,а также в случае близкого бытового контакта с больным вторичным сифилисом
• Детям,родившимся от больных сифилисом матерей
• Лицам с подтвержденным диагнозом других половых инфекций
• Для подтверждения результатов скрининга (отборочных реакций)

Контроль за лечением сифилиса
Так как к моменту снятия с учета леченного больного сифилисом микрореакция преципитации с кардиолипиновым  антигеном  обычно  негативируется, а позитивные  специфические  реакции (РИТ, РИФ, ИФА, РПГА.) могут наблюдаться долго после окончания лечения (поэтому эти тесты не могут служить критерием излеченности) микрореакция преципитации является основным тестом для установления критерия излеченности сифилиса.

Снижение титров нетрепонемных тестов в 4 и более раза в течении года после лечения подверждает эффективность проведенной терапии сифилиса и является критерием его излеченности( Приказ Минздрава РФ № 87 от 26.03.01 г,МЗ РФ Приказ от 25 июля 2003 г. N 327,Рекомендации CDC (USA) 2006)

Применяется количественная модификация микрореакции преципитации.Величина титра указывает на активность процесса, а его снижение во время лечения  -  на эффективность терапии. Стабильность титров должна настораживать в отношении эффективности терапии, увеличение их требует пересмотра лечения.

Как проводится микрореакция преципитации

Материал для исследования: кровь из пальца,венозная кровь,спинномозговая жидкость.Взятие крови желательно производить натощак.

Схема микрореакции преципитации
Для проведения реакции используется классический VDRL-антиген (кардиолипин+лецитин+холестерин) с добавлением частиц  угля для визуальной оценки результатов.теста.Исследуемая сыворотка крови перемешивается на стекле с антигеном.Если в сыворотке содержатся реагиновые антитела то образуются чёрные хлопья (флоккулянты), являющиеся признаком положительной реакции. При отсутствии реагиновых антител в сыворотке образования хлопьев (флоккуляции) не происходит.

Результаты микрореакции на сифилис
При обнаружении антилипидных антител - положительная реакция (при проведении количественной модификации титры от 1: 2  до 1: 320 и выше
При отсутствии антилипидных антител - отрицательная реакция
При низких титрах антител - сомнительная реакция

Как оценивается микрореакция преципитации

Микрореакция становиться положительной в среднем через 4-5 недель после инфицирования.По мере развития сифилитической инфекции титры ее нарастают,при скрытом и позднем сифилисе количество антител уменьшается и микрореакция может быть оценена как слабоположительная или сомнительня,а иногда при третичном сифилисе и отрицательная.

Наиболее часто в мировой венерологии,а последнее время и в России результаты микрореакции оценивает совместно с трепонемными тестами РИФ и РПГА

Какие ошибки могут быть при постановке микрореакции

Микрореакция преципитации не применяется для подтверждающей диагностики сифилиса,так как кроме антител к липидным антигенам бледной трепонемы, в этих реакциях определяются антитела к липидам и липопротеинам, образовавшимся в результате повреждения клеток организма.Поэтому положительные результаты нетрепонемных серологических реакций в ряде случаев могут быть не связаны с сифилисом,а быть результатом неспецифических повреждений тканей.Кроме того как к ложноположительным, так и ложноотрицательным результатам могут приводить нарушения при проведении теста.

Неправильная техника проведения исследования

• неправильное взятие крови из пальца (наличие пузырей воздуха в капилляре пипеток);
• исключение   из  постановки  реакции  контрольных  сывороток  крови, в частности, слабоположительных;
• неравномерная  концентрация  антигена  в эмульсии вследствие недостаточного перемешивания ее перед использованием;
• бактериальное загрязнение эмульсии;
• нарушение сроков  и  условий  хранения  плазмы  и  сыворотки крови, антигена и его эмульсии, растворов;
• замена трехзамещенного цитрата натрия двухзамещенным;
• использование  при постановке реакций загрязненных пробирок, пипеток, пластинок, растворов.

Причины ложноположительные результатов микрореакции на сифилис

1. Антифосфолипидный синдром
2. Невенерические трепонематозы
3. Беременность
4. Сахарный диабет
5. Туберкулез
6. Онкологические заболевания
7. Аутоиммунные (системные) заболевания (системная красная волчанка,дерматомиозит и.т.д.)
8. Подагра
9. Хронический алкоголизме и наркомании;
10. Инфекционный мононуклеоз (инфекция Эпштейн-Барра)
11. Вирусные гепатитаы
12. Пневмонии

Причины ложноотрицательных результатов микрореакции на сифилис

Встречаются редко и связаны с так называемым эффектом "прозоны" при очень высоком содержании антител в крови.Ложноотрицательные результаты надо отличать от отрицательных результатов микрореакции при первичном периоде сифилиса,когда при наличии сифилитической инфекции организм еще не успел выработать антитела и при позднем третичном сифилисе,когда уровень антилипидных антител существенно снижен.

При положительных результатах микрореакции преципитации) МР) ,если она не проводилась с целью контроля за излеченностью сифилиса,в обязательном порядке необходим осмотр дерматовенеролога и исследование крови с помощью трепонемных тестов

Где можно получить еще информацию

посещений  49142 обновлено 11.06.10